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张总 先生
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发布时间:2020-08-20 10:46:42
突破传统桎梏,将分子检测带入一个新领域
具体操作方法如下:
1. 采用我司自主开发的快速核酸释放剂提取核酸(核酸释放剂与样本混匀,室温静置5分钟即可取上清作为核酸模板),或者采用市场常见“离心柱法”和“磁珠法”提取核酸作为模板亦可;
2. 取上述模板2μL加入到复融后的反应液中,通过上述各种加热手段,保证加热温度在37°~42°之间10分钟即可。
3. 上述反应时间结束后,向反应液中加入少许无菌水稀释,后直接插入试纸条,则马上可通过试纸条上的条带颜色变化,从而判定阴阳性。
2 自主研发用时,引物设计注意事项:
核酸试纸条三明治夹心检验法探针设计:在上下游引物中间设计一条长度为46-52nt与目的片段互补序列;5’端修饰一个抗原标记(典型FAM);5’端和3’端中间位置标记一个dSpacer(THF);3’端标记一个修饰基团,如胺基、生物素或C3-Spacer,同时要求下游引物5’端标记一个修饰基团。
大动物快速分子检测综合解决方案
———MIRA分子检测技术的应用
随着2018年底席卷***的非洲疫情的爆发,***对大型养殖amp;屠宰企业,乃至整个食品供应链的安全生产日趋重视,规范也越来越严格。同时,随着农业有关部门正式下文要求务必采取PCR检测方法进行生猪的非洲健康检验。核酸检测amp;PCR技术也正式进入畜牧养殖企业的质量监管体系中。但是,PCR分子检测技术一直以来都是科研系统的***技术,对操作人员、操作环境以及操作成本都有很高的要求,这也是其一直以来在科研(如兽研所)以外非***领域难以推广开来的原因。
多酶恒温快速扩增技术在大动物分子诊断领域的应用
————MIRA助力猪疫病的检测
2018年10月开始的非洲猪疫情,很大的冲击了中国生猪养殖市场和屠宰市场。造成了市场格局的大幅变化,也提升了***和民众对畜牧养殖的认识和重视,从简单的关注食品安全开始向关注食材原料安全转移。随着疫情的逐渐缓和,疫情的检测主体已经从生猪检测向环境监控转化。例如,厂区周边取样、运送生猪的车辆取样、进出人员的衣物取样等。这些预防性检测已占据养殖场日常检测量的80%以上,因此对养殖过程中诊断提出了更高的要求,需要便携、快捷、易操作、便于临场检测的新技术,而传统PCR检测技术存在检测时间长、人员技术要求高和设备昂贵等特点,在实际应用上,越来越不适合畜牧养殖等非***区域的检测需求。而我司的MIRA技术恰恰可以弥补上述缺陷。MIRA多酶恒温快速扩增技术,模仿细胞内核酸过程,在体外、常温、恒温的状态下实现核酸的指数式扩增。其核心就是利用多酶系统替代以往利用精密温控设备(PCR仪)才能完成的变性、退火、延伸等流程。
恒温快速扩增***盒操作步骤
提前30分钟将***盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。
1) 每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2) 每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针(引物和探针浓度为10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3) 向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为13.5 μL);
4) 然后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5) 混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 oC孵育8-12 mins;
6) 反应结束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中,混合均匀后,将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡,5 mins内观察质控线与检测线判读结果。
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